GlyT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403077
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GlyT2 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GlyT2, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GlyT2 Anticuerpo (B-4): sc-390090
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GlyT2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403077 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SLC6A5 codifica el transportador presináptico de glicina GlyT2 (familia SLC6), un transportador dependiente de Na\+/Cl\- que media la recaptación de alta afinidad de glicina hacia neuronas glicinérgicas inhibitorias. Al reponer la glicina citosólica para su carga en vesículas, GlyT2 sostiene la inhibición sináptica rápida en la médula espinal y el tronco encefálico y ayuda a modular la excitabilidad de las redes neuronales. Este transportador se integra con procesos de reciclaje de neurotransmisores y de homeostasis del cloruro que regulan el tono inhibidor y la salida de los circuitos sensoriomotores. La alteración o desregulación de SLC6A5 se ha vinculado con una señalización glicinérgica deficiente y con fenotipos neurofisiológicos relevantes para la hiperekplexia hereditaria y otras disfunciones relacionadas de las sinapsis inhibitorias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GlyT2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC6A5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC6A5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC6A5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GlyT2.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC6A5 para la investigación de la señalización de GlyT2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de SLC6A5 críticos para la función de GlyT2
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC6A5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GlyT2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GlyT2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC6A5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GlyT2 (h) y el plásmido HDR GlyT2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC6A5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC6A5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.