Plásmido Doble Nickase (h) Glucosidase IIβ: sc-404394-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Glucosidase IIβ consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Glucosidase IIβ (h) y el plásmido de doble nickasa Glucosidase IIβ (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRKCSH. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Glucosidase IIβ Anticuerpo (H-4): sc-374457
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Glucosidase IIβ | sc-404394-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Glucosidase IIβ | sc-404394-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKCSH codifica la subunidad β de la glucosidasa II, un complejo enzimático luminal del retículo endoplásmico (RE) que elimina residuos de glucosa de glicanos unidos a N durante la maduración de glicoproteínas. Este paso de procesamiento sostiene el ciclo de control de calidad dependiente de calnexina/calreticulina y ayuda a coordinar la degradación asociada al RE (ERAD) de proteínas mal plegadas, vinculando la función de PRKCSH con la proteostasis y la señalización de la respuesta a proteínas desplegadas. La alteración de la actividad de la glucosidasa IIβ puede perturbar la secreción y la expresión en superficie de glicoproteínas, modificando la señalización celular y la adaptación al estrés. La variación genética en PRKCSH se ha asociado con la enfermedad hepática poliquística autosómica dominante, por lo que es relevante para estudios de biología epitelial, estrés de orgánulos y vías dependientes de glicoproteínas.
Glucosidase IIβ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKCSH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKCSH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKCSH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKCSH alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.