Glucosidase I Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405014-ACT

MOGS codifica a glicosidase I, uma α-glicosidase residente no RE (retículo endoplasmático) que catalisa a primeira etapa de remoção de glicose no processamento de glicanos ligados a N em glicoproteínas recém-sintetizadas. Essa atividade é central para o controle de qualidade do RE, influenciando o dobramento assistido por calnexina/calreticulina, a competência para secreção e a degradação associada ao RE (ERAD) de proteínas mal dobradas. Ao moldar a maturação de glicoproteínas, MOGS impacta a proteostase e as respostas celulares ao estresse do RE e à resposta a proteínas mal dobradas (UPR). Alterações na função de MOGS têm sido associadas a distúrbios congênitos da glicosilação e podem modular interações hospedeiro–patógeno por meio de efeitos no processamento de glicoproteínas do envelope viral, sustentando sua relevância em contextos de pesquisa em glicobiologia e infecções.

Glucosidase I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MOGS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glucosidase I O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MOGS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MOGS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glucosidase I. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MOGS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glucosidase I no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glucosidase I em células tumorais com expressão de MOGS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.