Plásmido CRISPR de Activación (h) Glucose Transporter Glut4: sc-400158-ACT

SLC2A4 codifica el transportador de glucosa Glut4, un transportador facilitador de glucosa sensible a la insulina que impulsa la captación de glucosa dependiente de estímulos en adipocitos y músculo esquelético. Tras la señalización de la insulina a través del eje PI3K–AKT, Glut4 se trasloca desde vesículas de almacenamiento intracelular hacia la membrana plasmática, acoplando la activación del receptor con la utilización celular de glucosa y la síntesis de glucógeno. El tráfico de Glut4 también está modulado por vías de estrés metabólico dependientes de AMPK y por la maquinaria de fusión vesicular, integrando la disponibilidad de nutrientes con la homeostasis energética. La desregulación de la expresión de SLC2A4 o la alteración de la traslocación de Glut4 se han implicado en la resistencia a la insulina y en fenotipos de enfermedades metabólicas, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar el manejo de la glucosa en modelos celulares humanos.

Glucose Transporter Glut4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC2A4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Glucose Transporter Glut4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC2A4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC2A4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Glucose Transporter Glut4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC2A4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Glucose Transporter Glut4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Glucose Transporter Glut4 en células tumorales con expresión de SLC2A4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.