Plasmide CRISPR/Cas9 KO GLT25D1 (h): sc-405631

Présentation

COLGALT1 code pour GLT25D1, une bêta(1‑O)galactosyltransférase du collagène localisée dans le réticulum endoplasmique, qui catalyse la galactosylation des résidus d’hydroxylysine lors des modifications post‑traductionnelles du collagène. Cette réaction s’inscrit dans une voie de glycosylation séquentielle indispensable au bon repliement, à la stabilité et à la sécrétion du collagène, influençant l’assemblage de la matrice extracellulaire et l’organisation de la membrane basale. L’activité de GLT25D1 s’articule avec la protéostasie du RE et le trafic sécrétoire, où une glycosylation altérée du collagène peut perturber la signalisation matrice–cellule et la mécanique tissulaire. La perturbation génétique ou la dérégulation des enzymes de glycosylation du collagène, dont COLGALT1, a été associée à des phénotypes du tissu conjonctif et du développement, et fait l’objet d’études dans le contexte de fibroses liées à la matrice, de troubles musculo‑squelettiques et du remodelage du microenvironnement tumoral.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GLT25D1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COLGALT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COLGALT1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COLGALT1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GLT25D1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COLGALT1 pour l'étude de la signalisation de GLT25D1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COLGALT1 essentiels à la fonction de GLT25D1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COLGALT1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GLT25D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GLT25D1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COLGALT1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GLT25D1 plasmide HDR (h) et le GLT25D1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COLGALT1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COLGALT1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.