Plasmide CRISPR/Cas9 KO girdin (m): sc-430846

Présentation

Le gène murin **Ccdc88a** code la **girdine** (également appelée **GIV**), une grande protéine d’échafaudage cytoplasmique qui intègre des signaux issus des protéines G hétérotrimériques et des récepteurs à activité tyrosine kinase afin de coordonner le remodelage de l’actine, la polarité cellulaire et la migration directionnelle. La girdine se localise au front de migration et s’associe à des régulateurs du cytosquelette pour influencer des processus tels que la formation de lamellipodes, le trafic vésiculaire et l’organisation épithéliale. Elle a été associée à la dynamique de la signalisation PI3K–AKT et au contrôle des programmes de croissance et de survie cellulaires, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la morphogenèse tissulaire et de la motilité cellulaire pathologique. Des dérégulations des voies associées à la girdine ont été rapportées dans divers contextes pathologiques où des altérations de l’adhérence et de la migration contribuent à la progression, ce qui étaye des investigations mécanistiques dans des systèmes modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO girdin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ccdc88a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ccdc88a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ccdc88a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine girdin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ccdc88a pour l'étude de la signalisation de girdin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ccdc88a essentiels à la fonction de girdin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ccdc88a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le girdin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le girdin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ccdc88a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le girdin plasmide HDR (m) et le girdin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ccdc88a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ccdc88a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.