Plásmido CRISPR de Activación (h) GHRH-R: sc-404197-ACT

GHRHR codifica el receptor de la hormona liberadora de la hormona del crecimiento (GHRH-R), un receptor acoplado a proteína G de clase B expresado predominantemente en los somatótrofos hipofisarios y en otros tejidos sensibles a señales endocrinas. Tras unirse a la GHRH, el GHRH-R activa la señalización de Gs/adenilato ciclasa para elevar el AMPc y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB que sustentan la síntesis y la secreción de la hormona del crecimiento. Este receptor también se integra en vías más amplias de homeostasis endocrina, incluida la regulación del eje de IGF-1 y procesos metabólicos y del desarrollo posteriores. Las alteraciones en la señalización de GHRHR se han asociado con trastornos de la regulación de la hormona del crecimiento y se han investigado en contextos de disfunción endocrina, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de redes de señalización hormonal.

GHRH-R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GHRHR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GHRH-R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GHRHR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GHRHR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GHRH-R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GHRHR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GHRH-R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GHRH-R en células tumorales con expresión de GHRHR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.