Gelsolin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432743

Descripción general

El gen **Gsn** de ratón codifica **gelsolina**, una proteína de unión a la actina regulada por Ca2+ que corta, tapa y nuclea filamentos de actina para controlar la remodelación del citoesqueleto. Al ajustar la dinámica de la actina, la gelsolina contribuye a cambios en la forma celular, la motilidad, la endocitosis y la fagocitosis, y se integra con redes de señalización como la regulación de fosfoinosítidos y vías vinculadas a las GTPasas de la familia Rho, que acoplan señales de membrana con la reorganización de la actina. La actividad y la expresión alteradas de la gelsolina se han asociado con migración celular desregulada, respuestas inflamatorias y remodelación tisular, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar fenotipos impulsados por el citoesqueleto. En sistemas murinos, la perturbación de **Gsn** respalda investigaciones mecanísticas sobre procesos dependientes de actina relevantes para la biología vascular, la neurobiología y la función de células inmunitarias.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gelsolin (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Gsn en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Gsn junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Gsn tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gelsolin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Gsn para la investigación de la señalización de Gelsolin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Gsn críticos para la función de Gelsolin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Gsn para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Gelsolin CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Gelsolin CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Gsn. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gelsolin (m) y el plásmido HDR Gelsolin (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Gsn para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Gsn definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.