Plasmide CRISPR d'Activation (h) GCNT3: sc-411258-ACT

Le gène humain **GCNT3** (glucosaminyl (N-acétyl) transférase 3) code une glycosyltransférase localisée dans l’appareil de Golgi qui allonge les O‑glycanes en catalysant la formation des structures « core 2 » et « core 4 » sur les glycoprotéines de type mucine. En remodelant la ramification des glycannes, GCNT3 influence la différenciation épithéliale, les propriétés de la barrière muqueuse, ainsi que les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice dépendantes de la reconnaissance des glycoprotéines et des glycolipides. Son activité s’inscrit dans les réseaux d’O‑glycosylation qui modulent la stabilité des récepteurs, leur trafic intracellulaire et la reconnaissance immunitaire, reliant ainsi GCNT3 à des voies régissant l’adhérence et la signalisation inflammatoire. Des altérations de l’expression de GCNT3 ou des profils de glycosylation ont été rapportées dans de multiples contextes de maladies épithéliales, notamment dans les cancers, où des changements de glycoformes des mucines peuvent affecter l’invasion, des phénotypes associés aux métastases et les interactions tumeur–microenvironnement.

GCNT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GCNT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GCNT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GCNT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GCNT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GCNT3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GCNT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GCNT3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GCNT3 dans les cellules tumorales présentant une expression de GCNT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.