GCH-I Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402386-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- GCH-IO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase GCH-I (h) e o Plasmídeo Double Nickase GCH-I (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GCH1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:GCH-I Anticorpo (G-8): sc-376483
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
GCH-I Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-402386-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GCH-I Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-402386-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GCH1 codifica a GTP ciclo-hidrolase I (GCH-I), a enzima limitante da velocidade na biossíntese *de novo* de tetraidrobiopterina (BH4) a partir de GTP. A BH4 é um cofator essencial, redox-ativo, para as hidroxilases de aminoácidos aromáticos e para todas as isoformas da óxido nítrico sintase, ligando assim a atividade da GCH-I à produção de catecolaminas e serotonina, bem como à sinalização por óxido nítrico e ao equilíbrio redox celular. Alterações na função de GCH1 podem perturbar o metabolismo de neurotransmissores e vias endoteliais de óxido nítrico, tornando-o relevante para estudos de homeostase neurometabólica, biologia vascular e estresse oxidativo. Variantes em GCH1 estão associadas a distúrbios hereditários de neurotransmissores e têm sido investigadas no contexto de sensibilidade à dor e fenótipos neuropsiquiátricos, apoiando pesquisas mecanísticas sobre relações entre genótipo e vias biológicas.
GCH-I O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GCH1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GCH1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GCH1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GCH1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.