Plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP3 (h): sc-402792

Présentation

La guanylate-binding protein 3 (GBP3) est une grande GTPase humaine inductible par les interférons, qui participe aux programmes de défense immunitaire innée en aval de la signalisation des interférons de type I/II. GBP3 contribue aux réponses antimicrobiennes et antivirales intrinsèques à la cellule en coordonnant des réseaux de gènes stimulés par les interférons et en régulant des processus restrictifs vis-à-vis des pathogènes et des processus inflammatoires, notamment via des interactions avec des voies associées à l’inflammasome. Des profils d’expression altérés de GBP3 ont été associés à une dérégulation immunitaire et à des états inflammatoires, et elle est fréquemment étudiée dans le contexte de la biologie des infections et des interactions tumeur–système immunitaire. En tant que marqueur et médiateur d’une signalisation induite par les interférons, GBP3 est pertinente pour l’analyse des réponses aux cytokines, des interactions hôte–pathogène et des programmes transcriptionnels liés à l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GBP3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GBP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GBP3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GBP3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GBP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GBP3 pour l'étude de la signalisation de GBP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GBP3 essentiels à la fonction de GBP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GBP3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GBP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GBP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GBP3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GBP3 plasmide HDR (h) et le GBP3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GBP3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GBP3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.