Plasmide CRISPR/Cas9 KO GBDR1 (h): sc-409781

Présentation

UBAC1 (également répertorié sous le nom de GBDR1) code une protéine contenant un domaine associé à l’ubiquitine, impliquée dans le contrôle qualité des protéines dépendant de l’ubiquitine et dans la régulation du renouvellement protéique. En se liant à des substrats ubiquitinylés et en interagissant avec le système ubiquitine–protéasome, UBAC1 est en mesure d’influencer des voies qui gouvernent la protéostase, les réponses au stress et la dynamique de signalisation, via la dégradation contrôlée de composants de ces voies. La dérégulation des réseaux d’ubiquitination est largement associée à une signalisation inflammatoire aberrante, à une altération du contrôle du cycle cellulaire, ainsi qu’à des processus neurodégénératifs et oncogéniques, ce qui fait d’UBAC1/GBDR1 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation médiée par l’ubiquitine. L’étude de la fonction d’UBAC1 peut aider à clarifier comment la reconnaissance et le trafic de l’ubiquitine contribuent à la robustesse des voies en conditions basales et de stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GBDR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBAC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBAC1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBAC1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GBDR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBAC1 pour l'étude de la signalisation de GBDR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBAC1 essentiels à la fonction de GBDR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBAC1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GBDR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GBDR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBAC1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GBDR1 plasmide HDR (h) et le GBDR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBAC1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBAC1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.