GATA4 Double Nickase Plasmid (h): sc-400122-NIC

GATA4 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GATA-Motive bindet und dadurch Genprogramme reguliert, die die kardiale Morphogenese, die Differenzierung von Kardiomyozyten sowie die Entwicklung endodermal abgeleiteter Organe steuern. Im Zusammenspiel mit Kofaktoren wie NKX2-5, TBX5 und Proteinen der FOG-Familie integriert GATA4 Signaleingänge aus unter anderem BMP-, WNT- und MAPK-Signalwegen, um die Festlegung von Zelllinien und den Gewebeumbau zu koordinieren. Veränderungen der GATA4-Dosierung oder -Sequenz können transkriptionelle Netzwerke stören, die die Herz- und Gastrointestinalentwicklung regulieren, und eine Fehlregulation der GATA4-abhängigen Enhancer-Aktivität wurde mit angeborenen Herzfehlern sowie mit kardiomyopathieassoziierten Veränderungen der Genexpression in Verbindung gebracht. Als zentraler Regulator der chromatinassoziierten Transkription wird GATA4 häufig eingesetzt, um entwicklungsbiologische Genregulationsschaltkreise und die Kontrolle von Zellschicksalen zu untersuchen.

GATA4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GATA4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GATA4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GATA4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GATA4-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.