Plasmide CRISPR d'Activation (h) GATA4: sc-400122-ACT

GATA4 code un facteur de transcription à doigt de zinc qui se fixe sur des motifs GATA afin de réguler des programmes géniques contrôlant la morphogenèse cardiaque, la différenciation des cardiomyocytes et le développement des tissus dérivés de l’endoderme. Il agit au sein de réseaux déterminant l’identité de lignée aux côtés de facteurs tels que NKX2-5 et TBX5, en intégrant des signaux pour moduler l’accessibilité de la chromatine et la sortie transcriptionnelle durant le développement et les réponses au stress. Dans les tissus adultes, GATA4 influence les voies de signalisation de l’hypertrophie cardiaque et de survie, et des altérations d’expression ou des variants ont été associés à des cardiopathies congénitales et à des cardiomyopathies. Une activité dérégulée de GATA4 est également étudiée dans des contextes de différenciation gastro-intestinale et de reprogrammation transcriptionnelle oncogénique.

GATA4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GATA4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GATA4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GATA4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GATA4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GATA4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GATA4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GATA4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GATA4 dans les cellules tumorales présentant une expression de GATA4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.