Plásmido Doble Nickase (h) GATA3: sc-400134-NIC

GATA3 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que se une a motivos GATA para controlar la especificación de linaje y los programas de diferenciación, con funciones destacadas en el desarrollo de las células T, la polarización Th2 y las decisiones de destino celular en epitelios. En células inmunitarias, GATA3 coordina la expresión de genes de citocinas y la remodelación de la cromatina para dar forma a la señalización inflamatoria de tipo 2, mientras que en contextos epiteliales contribuye al mantenimiento de los estados de diferenciación mediante la regulación de redes transcripcionales. La alteración de los circuitos regulados por GATA3 se ha vinculado con disfunción inmunitaria y diferenciación anómala, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado en el control transcripcional, la identidad celular y la expresión génica sensible a estímulos. Como regulador nuclear, GATA3 se analiza con frecuencia en estudios sobre el uso de potenciadores (enhancers), la cooperatividad entre factores de transcripción y las transiciones de estado celular.

GATA3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GATA3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GATA3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GATA3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GATA3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.