GATA-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400724

Übersicht

GATA6 kodiert GATA-6, einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an GATA-Motive bindet, um die Festlegung von Zelllinien sowie Differenzierungsprogramme in endoderm- und mesodermabgeleiteten Geweben zu regulieren. Er ist Teil von Transkriptionsnetzwerken mit Faktoren wie NKX2-5 und Mitgliedern der TBX-Familie, um die Organogenese und Entscheidungen über das Zellschicksal zu koordinieren, und steht in Wechselwirkung mit Signaleingängen, darunter die WNT-, BMP- und TGF-β-Signalwege. In adulten Zellen trägt GATA-6 zur Regulation epithelialer und glatter Muskelgene, zum zellulären Stoffwechsel und zu stressresponsivem transkriptionellem Remodeling bei. Eine fehlregulierte GATA6-Aktivität wurde mit Entwicklungsdefekten in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext veränderter Differenzierungszustände und transkriptioneller Abhängigkeiten untersucht, die in mehreren Krankheitsmodellen, einschließlich Krebs, beobachtet werden.

Das GATA-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GATA6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GATA6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GATA6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GATA-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GATA6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GATA-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GATA6-Exone abzielen, die für die GATA-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GATA6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GATA-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GATA-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GATA6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GATA-6 HDR-Plasmid (h) und GATA-6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GATA6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GATA6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.