Plasmide CRISPR d'Activation (h) GAS41: sc-404113-ACT

YEATS4 code GAS41, une protéine nucléaire contenant un domaine YEATS qui agit comme régulateur de la transcription associé à la chromatine. GAS41 participe au remodelage de la chromatine et aux voies de signalisation liées à l’acétylation des histones, notamment via des interactions avec des complexes multiprotéiques impliqués dans l’expression génique dépendante de l’ARN polymérase II et le contrôle du cycle cellulaire. Par ces mécanismes épigénétiques, YEATS4 influence la prolifération, la régulation du génome et les réponses cellulaires au stress. Une activité dérégulée de YEATS4/GAS41 a été rapportée dans des contextes associés au cancer, ce qui soutient son étude dans les programmes transcriptionnels oncogéniques et la biologie des maladies liées à la chromatine.

GAS41 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de YEATS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GAS41 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus YEATS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription YEATS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GAS41. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus YEATS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GAS41 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GAS41 dans les cellules tumorales présentant une expression de YEATS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.