Plásmido Doble Nickase (h) GAPDH: sc-400002-NIC

GAPDH codifica la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa, una enzima citosólica conservada que cataliza un paso clave de la glucólisis, conectando el metabolismo de la glucosa con la producción de ATP y la homeostasis redox mediante el ciclo NAD+/NADH. Más allá de su función metabólica, GAPDH participa en respuestas celulares al estrés, incluida la regulación de la apoptosis, la unión a ARN y la señalización nuclear en condiciones oxidativas o nitrosativas. Como nodo central del metabolismo energético, la expresión y la actividad de GAPDH se modulan con frecuencia durante la hipoxia y la reprogramación metabólica, procesos relevantes para la biología tumoral, la neurodegeneración y los estados inflamatorios. Su expresión basal ubicua y elevada también convierte a GAPDH en una diana de referencia común en flujos de trabajo de expresión génica y proteómica, donde su perturbación puede ayudar a evaluar sesgos de normalización y factores de confusión metabólicos.

GAPDH El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GAPDH en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GAPDH. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GAPDH. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GAPDH alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.