Plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (m): sc-420484

Présentation

Gap43 code pour la protéine 43 associée à la croissance (GAP-43), une phosphoprotéine associée à la membrane, enrichie dans les neurones, qui se localise aux cônes de croissance et aux terminaisons présynaptiques, où elle régule la croissance des neurites, le guidage axonal et le remodelage synaptique. La fonction de GAP-43 est étroitement liée à la dynamique du cytosquelette d’actine et à la signalisation dépendante du calcium, notamment à la phosphorylation médiée par la PKC, qui module les interactions membranaires et les processus associés à la plasticité. Chez la souris, l’expression de Gap43 augmente au cours du développement et après une lésion nerveuse, ce qui en fait un marqueur moléculaire largement utilisé de la croissance axonale et des réponses régénératives. Un remodelage des circuits dépendant de GAP-43 et dérégulé a été associé à une connectivité synaptique altérée dans des modèles de troubles neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ce qui souligne sa pertinence pour des études mécanistiques du fonctionnement des réseaux neuronaux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GAP-43 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Gap43 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Gap43, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Gap43 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GAP-43.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Gap43 pour l'étude de la signalisation de GAP-43, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Gap43 essentiels à la fonction de GAP-43
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Gap43 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GAP-43 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le GAP-43 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Gap43. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GAP-43 plasmide HDR (m) et le GAP-43 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Gap43 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Gap43 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.