GABP-β1/2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404040-ACT

GABPB1 kodiert die GA-bindende Proteinuntereinheit Beta-1/2 (GABP-β1/2), den obligaten Partner der DNA-bindenden Untereinheit aus der ETS-Familie, die zusammen den GABP-Transkriptionsfaktorkomplex bilden. Dieser Komplex reguliert Promotor- und Enhancer-Programme, die die mitochondriale Biogenese und Atmung, den Zellzyklusfortschritt sowie die Differenzierung steuern, indem er die Expression nukleär kodierter mitochondrialer Gene und weiterer wachstumsassoziierter Zielgene koordiniert. Die GABP-Signalgebung überschneidet sich mit Signalwegen, die die zelluläre Energiehomöostase, die Proliferationsfähigkeit und die Festlegung der Zelllinie aufrechterhalten, und eine veränderte GABP-Aktivität wurde mit fehlregulierten Transkriptionsnetzwerken bei Krebs und anderen Störungen des Zellstoffwechsels in Verbindung gebracht. Da GABP ETS-abhängige Transkription mit mitochondrialen und biosynthetischen Programmen integriert, wird GABPB1 häufig in Kontexten wie oxidativer Phosphorylierung, Stressanpassung und onkogenem transkriptionellem Rewiring untersucht.

GABP-β1/2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GABPB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GABP-β1/2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GABPB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GABPB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GABP-β1/2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GABPB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GABP-β1/2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GABP-β1/2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GABPB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.