Plásmido CRISPR de Activación (h) GABA_A Rδ: sc-401954-ACT

GABRD codifica la subunidad δ del receptor humano GABA_A, un canal de cloruro activado por ligando que media la neurotransmisión inhibitoria tónica en el sistema nervioso central. La incorporación de la subunidad δ en complejos receptores extrasinápticos confiere una alta sensibilidad al GABA ambiental y contribuye a una conductancia sostenida de cloruro que modula la excitabilidad neuronal y las oscilaciones de red. Mediante la regulación del tono inhibitorio, la señalización del receptor GABA_A con subunidad δ se vincula con la plasticidad sináptica, la modulación por neuroesteroides en respuesta al estrés y el equilibrio entre excitación e inhibición. La investigación ha relacionado la alteración de la expresión de GABRD o de la composición del receptor con fenotipos neuropsiquiátricos y neurológicos que implican una señalización inhibitoria alterada, incluida la susceptibilidad a convulsiones y endofenotipos relacionados con el estado de ánimo.

GABAA Rδ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GABRD sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABAA Rδ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GABRD en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GABRD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABAA Rδ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GABRD y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABAA Rδ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABAA Rδ en células tumorales con expresión de GABRD silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.