Plásmido CRISPR de Activación (h) GABARAPL2: sc-403558-ACT

GABARAPL2 (proteína similar 2 asociada a la proteína asociada al receptor GABA tipo A) es una proteína tipo ubiquitina de la familia ATG8 que se lipidiza y se incorpora a las membranas de los autofagosomas, donde favorece el reconocimiento de la carga, la elongación de la vesícula y la maduración del autofagosoma. Contribuye a programas de autofagia selectiva, incluida la mitofagia y la agrefagia, mediante interacciones con adaptadores que contienen una región de interacción con LC3 (LIR) y con reguladores del tráfico de membranas. Al conectar la autofagia con la dinámica del sistema endomembranoso, GABARAPL2 influye en la proteostasis celular y en vías de adaptación al estrés como la detección de nutrientes y el recambio lisosomal. La autofagia desregulada y la actividad de la red ATG8 se han implicado ampliamente en la neurodegeneración, la biología del cáncer, las infecciones y la señalización inflamatoria, lo que convierte a GABARAPL2 en un nodo útil para estudios mecanísticos en estos contextos.

GABARAPL2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GABARAPL2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GABARAPL2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GABARAPL2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GABARAPL2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GABARAPL2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GABARAPL2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GABARAPL2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GABARAPL2 en células tumorales con expresión de GABARAPL2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.