Plasmide Double Nickase (h) G9a: sc-402484-NIC

EHMT2 code pour la méthyltransférase de lysine G9a, l’un des principaux « writers » de H3K9me1/2, qui met en place une chromatine répressive et favorise un silençage génique stable au cours du développement et de la spécification des lignages. G9a agit au sein de complexes épigénétiques nucléaires pour coordonner l’organisation de la chromatine, les programmes transcriptionnels, les réponses aux dommages de l’ADN et les interactions avec d’autres voies de méthylation des histones et de l’ADN. Une activité altérée d’EHMT2/G9a a été associée à la dérégulation transcriptionnelle étendue observée en biologie des cancers, à des phénotypes neurodéveloppementaux et à la signalisation inflammatoire, ce qui en fait un nœud commun dans les études de plasticité épigénétique. L’étude de la méthylation de H3K9 dépendante de G9a aide à préciser comment l’état de la chromatine influence la prolifération, la différenciation et les réseaux transcriptionnels d’adaptation au stress dans les cellules humaines.

G9a Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EHMT2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EHMT2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EHMT2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EHMT2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.