Partículas Lentivirales de Activación (h) G6PD: sc-401019-LAC
- Especies Diana: human
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h) G6PD es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h) G6PD incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el G6PD Plásmido de activación lentiviral (h) y el G6PD Plásmido de activación lentiviral (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor G6PD. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: G6PD Anticuerpo (G-12): sc-373886
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (h) G6PD | sc-401019-LAC | 200 µl | $455.00 |
La glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PD) es la enzima limitante de la rama oxidativa de la vía de las pentosas fosfato, y genera el NADPH necesario para la reducción del glutatión, la desintoxicación de especies reactivas de oxígeno y la homeostasis redox. En células humanas, la actividad de G6PD sostiene el metabolismo biosintético al aportar ribosa-5-fosfato para la síntesis de nucleótidos y equivalentes reductores para el metabolismo de lípidos y del óxido nítrico. Las alteraciones en la expresión de G6PD o en su actividad enzimática influyen en la susceptibilidad al estrés oxidativo, la función mitocondrial y la reprogramación metabólica. La deficiencia de G6PD es una enzimopatía hereditaria frecuente con sensibilidad hematológica a desafíos oxidativos, y la regulación alterada de G6PD se estudia en contextos de inflamación, biología de infecciones y metabolismo del cáncer.
Las partículas de activación lentiviral G6PD (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de G6PD en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral G6PD (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción G6PD, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de G6PD. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo G6PD y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.