Plásmido CRISPR de Activación (h) G3BP2: sc-403630-ACT

La G3BP2 humana (factor de ensamblaje 2 de gránulos de estrés de G3BP) es una proteína de unión a ARN que actúa como un nucleador central de los gránulos de estrés citoplasmáticos, integrando la señalización y el metabolismo del ARNm durante el estrés celular. Participa en el control de la traducción, la estabilización/degradación del ARNm y las respuestas innatas al estrés mediante interacciones que influyen en la dinámica de los complejos ribonucleoproteicos y en vías vinculadas a quinasas activadas por estrés. G3BP2 también contribuye a una regulación postranscripcional más amplia al coordinar ensamblajes de ARN-proteína que afectan la supervivencia celular y la adaptación a señales del entorno. La desregulación de la expresión de G3BP2 y de la biología de los gránulos de estrés se ha asociado con fenotipos relacionados con el cáncer y con alteraciones de la proteostasis relevantes para la neurodegeneración, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de los gránulos de ARN.

G3BP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de G3BP2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

G3BP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus G3BP2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional G3BP2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de G3BP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo G3BP2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de G3BP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía G3BP2 en células tumorales con expresión de G3BP2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.