Plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-l (m): sc-420423

Présentation

Fut1 code pour l’α(1,2)-fucosyltransférase 1 (FucT-1), une glycosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui transfère le fucose depuis le GDP-fucose vers des résidus de galactose terminaux, générant des glycannes α1,2-fucosylés tels que les antigènes de type H sur les glycoprotéines et les glycolipides. Cette étape enzymatique constitue un élément central de la maturation des glycosphingolipides et des glycoprotéines et façonne les motifs glucidiques de surface cellulaire, lesquels influencent la liaison aux lectines, l’organisation membranaire et la reconnaissance intercellulaire. La fucosylation dépendante de Fut1 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la différenciation épithéliale, la fonction de barrière des muqueuses et les interactions hôte–microbe, via la modulation de l’adhésion et de la signalisation médiées par les glycannes. Une α1,2-fucosylation altérée a été associée à l’inflammation et à une dysrégulation immunitaire dans de multiples contextes, faisant de Fut1 un nœud utile pour des études mécanistiques des phénotypes dépendants des glycannes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-l (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fut1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fut1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fut1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FucT-l.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fut1 pour l'étude de la signalisation de FucT-l, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fut1 essentiels à la fonction de FucT-l
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fut1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FucT-l plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FucT-l plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fut1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FucT-l plasmide HDR (m) et le FucT-l (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fut1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fut1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.