Plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-IX (m): sc-420427

Présentation

Le gène murin Fut9 code la fucosyltransférase IX (FucT‑IX), une α1,3‑fucosyltransférase résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse la fucosylation terminale des N‑glycanes et des glycolipides, contribuant à la synthèse d’épitopes de type Lewis tels que Lewis X. Cette activité de glycosylation module l’adhérence cellule–cellule, le trafic des récepteurs et la transduction du signal en façonnant les interactions dépendantes des glycannes entre protéines membranaires et ligands extracellulaires. La fucosylation dépendante de Fut9 est fréquemment étudiée dans le cadre de programmes de développement et de processus liés à l’immunité, où des motifs glycanes régulent l’adhérence des leucocytes et l’organisation des tissus. Des profils de fucosylation dérégulés et une expression modifiée des antigènes Lewis sont également utilisés comme marqueurs moléculaires dans des modèles d’inflammation et de transformation oncogénique, sans prétendre à une utilité clinique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FucT-IX (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Fut9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Fut9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Fut9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FucT-IX.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Fut9 pour l'étude de la signalisation de FucT-IX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Fut9 essentiels à la fonction de FucT-IX
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Fut9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FucT-IX plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le FucT-IX plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Fut9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FucT-IX plasmide HDR (m) et le FucT-IX (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Fut9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Fut9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.