Plasmide CRISPR/Cas9 KO FRY (h): sc-404629

Présentation

FRY (homologue furry) code une grande protéine d’échafaudage, conservée au cours de l’évolution, qui agit en aval des kinases sérine/thréonine de la famille NDR/LATS, en coordonnant des signaux régulant la polarité cellulaire, l’organisation du cytosquelette et le trafic vésiculaire polarisé. Par ces voies, FRY contribue au contrôle de la morphogenèse cellulaire, de la migration et de l’organisation épithéliale, des processus étroitement liés au développement et à l’homéostasie des tissus. Une altération de la fonction de FRY a été associée à une dérégulation des signaux de croissance et à des défauts de polarité, fréquemment impliqués dans la biologie du cancer et d’autres troubles liés à une architecture cellulaire altérée. En tant que modulateur de réseaux de signalisation centrés sur des kinases, FRY présente un intérêt pour des études mécanistiques portant sur la régulation liée à Hippo, la dynamique du cytosquelette et les réponses au stress dépendantes du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FRY (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FRY dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FRY, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FRY à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FRY.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FRY pour l'étude de la signalisation de FRY, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FRY essentiels à la fonction de FRY
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FRY pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FRY plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FRY plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FRY. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FRY plasmide HDR (h) et le FRY (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FRY pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FRY définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.