Plásmido CRISPR de Activación (h) FRS2: sc-400656-ACT

FRS2 (sustrato 2 del receptor del factor de crecimiento de fibroblastos) es una proteína adaptadora proximal a la membrana que acopla los FGFR activados a cascadas de señalización aguas abajo, incluidas las vías RAS–MAPK/ERK y PI3K–AKT. A través de su dominio PTB y múltiples sitios de fosforilación en tirosina, FRS2 coordina el reclutamiento de GRB2/SOS y GAB1 para propagar señales mitogénicas y de supervivencia que moldean la proliferación, la diferenciación y la migración. La señalización dependiente de FRS2 es fundamental para los programas de desarrollo y de homeostasis tisular impulsados por ligandos FGF, y la actividad aberrante del eje FGFR–FRS2 está implicada en una señalización de crecimiento desregulada en la biología del cáncer. Como nodo de la vía, FRS2 se estudia con frecuencia por su papel en la integración de señales de receptores tirosina quinasa, la regulación por retroalimentación y la comunicación cruzada con otras vías de factores de crecimiento.

FRS2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FRS2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FRS2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FRS2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FRS2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FRS2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FRS2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FRS2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FRS2 en células tumorales con expresión de FRS2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.