FRP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422898

Übersicht

Frzb kodiert FRP-3 (auch bekannt als „secreted frizzled-related protein 3“), einen extrazellulären Modulator der Wnt-Signalübertragung, der Wnt-Liganden bindet und die Aktivierung von Frizzled-Rezeptoren abschwächen kann. Durch die Beeinflussung sowohl der kanonischen, β‑Catenin‑abhängigen Transkription als auch nichtkanonischer Wnt-Signalwege trägt FRP-3 zur Regulation der embryonalen Musterbildung, der Gewebemorphogenese und der Differenzierung mesenchymaler Zelllinien bei, einschließlich der Homöostase von Knochen und Knorpel. In Mausmodellen wurde eine veränderte FRP-3-Aktivität mit Änderungen der Dynamik der Knochenbildung und des Remodellings der extrazellulären Matrix in Verbindung gebracht – Prozesse, die häufig mit Entwicklungsanomalien und degenerativen Phänotypen verknüpft sind. Da die Wnt-Signalgebung eng mit Zellschicksalsentscheidungen und der Kontrolle der Proliferation gekoppelt ist, wird Frzb häufig in Kontexten untersucht, in denen ein Ungleichgewicht des Signalwegs zu entzündungsassoziiertem Gewebeumbau und zur Tumorbiologie beiträgt.

Das FRP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Frzb-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Frzb-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Frzb nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FRP-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Frzb-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FRP-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Frzb-Exone abzielen, die für die FRP-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Frzb-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FRP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom FRP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Frzb-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FRP-3 HDR-Plasmid (m) und FRP-3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Frzb-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Frzb-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.