Plasmide CRISPR d'Activation (h) FRP-2: sc-402000-ACT

Le gène humain **SFRP2** code la protéine sécrétée apparentée aux récepteurs Frizzled 2 (**FRP‑2**), un modulateur soluble de la signalisation Wnt qui se lie aux ligands Wnt et aux récepteurs Frizzled afin de façonner des programmes transcriptionnels dépendants de la **β‑caténine**. En ajustant l’activité de la voie Wnt, FRP‑2 influence les décisions de destinée cellulaire, la prolifération, la migration et le remodelage de la matrice extracellulaire au cours du développement et du maintien de l’homéostasie des tissus adultes. Des altérations de l’expression de **SFRP2** et de sa régulation épigénétique ont été associées à la dérégulation de l’activité Wnt/β‑caténine observée en cancérologie, ainsi qu’à des microenvironnements fibreux et inflammatoires. Ces propriétés font de **SFRP2** un nœud pertinent pour étudier la signalisation paracrine, les interactions stroma–épithélium et les dialogues entre voies (crosstalk) qui affectent la différenciation et le remodelage tissulaire.

FRP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SFRP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FRP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SFRP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SFRP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FRP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SFRP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FRP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FRP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SFRP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.