frizzled-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406690

Übersicht

FZD10 kodiert Frizzled-10, einen WNT-Rezeptor mit sieben Transmembrandomänen, der die Signaltransduktion sowohl über die kanonische, β‑Catenin‑abhängige Transkription als auch über nichtkanonische Signalwege reguliert, die die planare Zellpolarität und den Calciumfluss steuern. Durch die Ausgestaltung von Rezeptor‑Ligand‑Interaktionen an der Zelloberfläche beeinflusst Frizzled-10 die Entwicklungsmusterbildung, epithelial‑mesenchymale Programme und die Gewebehomöostase. Eine fehlregulierte FZD10-Aktivität und veränderte WNT/Frizzled-Signalgebung werden häufig im Kontext onkogener Signalnetzwerke, der Invasion von Tumorzellen und aberranter Differenzierungszustände untersucht. FZD10 dient zudem als Knotenpunkt zur Analyse des Crosstalks zwischen WNT-Signalen und wachstumsfaktorresponsiven Transkriptionsprogrammen.

Das frizzled-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FZD10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FZD10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FZD10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die frizzled-10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FZD10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der frizzled-10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FZD10-Exone abzielen, die für die frizzled-10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FZD10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom frizzled-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom frizzled-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FZD10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das frizzled-10 HDR-Plasmid (h) und frizzled-10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FZD10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FZD10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.