FRAT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406922

Übersicht

FRAT1 (frequently rearranged in advanced T-cell lymphomas 1) kodiert einen positiven Regulator des Wnt/β‑Catenin-Signalwegs, der die Signalstärke durch Hemmung GSK3-abhängiger Phosphorylierungsereignisse erhöht, dadurch β‑Catenin stabilisiert und Transkriptionsprogramme fördert, die mit Proliferation und Differenzierung verknüpft sind. Durch die Modulation zytoplasmatischer und nukleärer Komponenten der Wnt-Signalkaskade beeinflusst FRAT1 Zellschicksalsentscheidungen, den Zellzyklusfortschritt sowie die kontextabhängige Kontrolle der Migration. Eine veränderte FRAT1-Expression wurde bei mehreren Tumorarten beschrieben und wird häufig als Knotenpunkt untersucht, der die Aktivität des Wnt-Signalwegs mit onkogenen Transkriptionsnetzwerken verbindet. FRAT1 ist daher relevant, um das Crosstalk zwischen Signalwegen zu analysieren, der stammzellähnliche Zustände, epithelial‑mesenchymale Transition (EMT)-assoziierte Programme und signalabhängige Transkriptionsregulation in humanen Zellen beeinflusst.

Das FRAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des FRAT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des FRAT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von FRAT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die FRAT1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von FRAT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der FRAT1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf FRAT1-Exone abzielen, die für die FRAT1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere FRAT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom FRAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom FRAT1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des FRAT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das FRAT1 HDR-Plasmid (h) und FRAT1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von FRAT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten FRAT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.