fractalkine Double Nickaseプラスミド (h): sc-402339-NIC

CX3CL1はフラクタルカインをコードしており、フラクタルカインは非典型的なケモカインとして、膜にアンカーされた接着分子として存在する形態と、プロテアーゼによる切断（シェディング）後に可溶性の化学走性因子（ケモアトラクタント）として働く形態の両方を持つ。フラクタルカインは単球、NK細胞、ならびに一部のT細胞に発現するCX3CR1に結合することで、血管および神経組織における白血球の停止（接着）、遊走、免疫監視を調節する。CX3CL1–CX3CR1シグナルはNF-κBやMAPKなどの炎症性経路ともクロストークし、内皮細胞の活性化、ミクログリアの応答、ニューロン–グリア間コミュニケーションを制御する。この軸の破綻（異常）は、心血管系、神経炎症、腫瘍関連の微小環境に共通してみられる慢性炎症や免疫細胞浸潤と関連づけられている。

fractalkine ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CX3CL1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CX3CL1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CX3CL1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CX3CL1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。