Plasmide Double Nickase (h) FOXJ1: sc-402226-NIC

FOXJ1 (forkhead box J1) code un facteur de transcription de la famille Forkhead qui agit comme régulateur maître de la ciliogenèse des cils mobiles, en coordonnant l’ancrage des corps basaux, l’assemblage de l’axonème et la différenciation des cellules épithéliales multiciliées. Il contrôle les programmes transcriptionnels nécessaires au battement ciliaire et à la clairance mucociliaire, reliant la polarité épithéliale et l’organisation du cytosquelette à la signalisation dépendante des cils et à l’écoulement des fluides. L’activité de FOXJ1 est centrale dans les lignées des voies aériennes et de l’épendyme, où une régulation fine soutient l’homéostasie tissulaire et la mise en place des patrons développementaux. Une expression dérégulée de FOXJ1 ou une ciliogenèse altérée induite par FOXJ1 est associée à des phénotypes humains liés aux ciliopathies, notamment des défauts de fonction mucociliaire et des anomalies épendymaires en lien avec l’hydrocéphalie.

FOXJ1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOXJ1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOXJ1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOXJ1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOXJ1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.