FOXC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403113-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FOXC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FOXC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und FOXC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FOXC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FOXC1: sc-293455
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FOXC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403113-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FOXC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403113-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FOXC1 (Forkhead-Box C1) ist ein Transkriptionsfaktor der Winged-Helix-Familie, der Genexpressionsprogramme reguliert, die die embryonale Entwicklung, die Festlegung von Zellschicksalen und die Musterbildung von Geweben steuern. Dabei spielt FOXC1 insbesondere eine wichtige Rolle bei der Bildung des vorderen Augenabschnitts, der kraniofazialen Morphogenese und in der Gefäßbiologie. Durch sequenzspezifische DNA-Bindung koordiniert FOXC1 transkriptionelle Netzwerke, die mit Entwicklungs-Signalwegen wie TGF-β/BMP und Wnt zusammenlaufen, und beeinflusst so Linienentscheidungen sowie den Umbau der extrazellulären Matrix. Eine fehlregulierte FOXC1-Aktivität wird mit angeborenen Fehlentwicklungen des vorderen Augenabschnitts (anterior segment dysgenesis) einschließlich Phänotypen aus dem Axenfeld–Rieger-Spektrum in Verbindung gebracht und trägt zu aberranten transkriptionellen Zuständen bei, wie sie in mehreren Krebsarten beobachtet werden. In Zellmodellen wird FOXC1 häufig im Hinblick auf seinen Einfluss auf die epithelial–mesenchymale Transition, stammzellähnliche Phänotypen sowie kontextabhängige Effekte auf Proliferation, Migration und Stressantworten untersucht.
FOXC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FOXC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FOXC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FOXC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FOXC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.