Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fos B: sc-400306-ACT

Le gène humain **FOSB** code **Fos B**, un facteur de transcription bZIP de la famille **AP-1** qui forme des hétérodimères avec les protéines **JUN** afin de réguler des programmes d’expression génique dépendants des stimuli. Fos B est rapidement induit par des facteurs de croissance, des cytokines et l’activité neuronale, reliant des signaux extracellulaires au contrôle transcriptionnel de la prolifération, de la différenciation, des réponses au stress et de la plasticité synaptique. Son activité s’intègre aux réseaux **MAPK/ERK** et aux gènes de réponse immédiate pour moduler des voies en aval impliquées dans l’inflammation et l’adaptation cellulaire. Une signalisation **FOSB** dérégulée a été associée à des phénotypes neuronaux et immunitaires altérés, et a été étudiée dans le contexte du remodelage transcriptionnel lié au cancer ainsi que des mécanismes des maladies neuropsychiatriques.

Fos B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FOSB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fos B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FOSB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FOSB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fos B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FOSB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fos B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fos B dans les cellules tumorales présentant une expression de FOSB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.