Plasmide Double Nickase (h) FN3K: sc-412985-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FN3K correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FN3K Double Nickase (h) et le plasmide FN3K Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FN3K. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FN3K Antibody (E-9): sc-271503
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FN3K | sc-412985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FN3K | sc-412985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FN3K humain code la fructosamine-3-kinase, une enzyme cytosolique de déglycation qui phosphoryle les produits d’Amadori présents sur les protéines glyquées afin de favoriser leur déstabilisation et leur élimination, contribuant ainsi au maintien de la protéostasie en situation de stress carbonylé et de glycation. L’activité de FN3K s’articule avec la prise en charge des métabolites réactifs dérivés du glucose, les réponses au stress oxydant et les voies de contrôle qualité des protéines qui influencent le vieillissement cellulaire et l’équilibre rédox. Une expression ou une activité altérée de FN3K a été associée à une variabilité de la charge de glycation des protéines et a été étudiée dans le contexte de dérégulations métaboliques et de phénotypes moléculaires liés au diabète. En recherche biomédicale, FN3K est étudiée pour son impact sur le renouvellement des protéines glyquées, les perturbations de signalisation causées par la glycation non enzymatique et les effets en aval sur la viabilité cellulaire et l’adaptation au stress.
FN3K Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FN3K dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FN3K. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FN3K. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FN3K.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.