Plasmide CRISPR d'Activation (h) FN3K: sc-412985-ACT

Le gène humain **FN3K** code la fructosamine-3-kinase, une enzyme cytosolique qui phosphoryle la fructoselysine et des cétoamines apparentées sur des protéines glyquées, favorisant leur déstabilisation puis leur déglycation. En limitant l’accumulation des produits de glycation avancée (AGE) et le dysfonctionnement protéique induit par la glycation, **FN3K** contribue à la protéostasie et à l’homéostasie métabolique sensible à l’état redox dans des contextes de flux glucidique élevé. L’activité de **FN3K** s’articule avec le métabolisme des glucides et les réponses au stress cellulaire en modulant la charge de glycation non enzymatique des protéines. Des altérations de l’expression ou de la fonction de **FN3K** ont été étudiées en lien avec la dérégulation métabolique et les complications associées à l’hyperglycémie chronique, ainsi qu’avec des effets plus larges sur le contrôle de la qualité des protéines.

FN3K Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FN3K sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FN3K Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FN3K dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FN3K, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FN3K. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FN3K natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FN3K au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FN3K dans les cellules tumorales présentant une expression de FN3K silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.