Flt-3/Flk-2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400218-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Flt-3/Flk-2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Flt-3/Flk-2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Flt-3/Flk-2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FLT3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Flt-3/Flk-2: sc-19635
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Flt-3/Flk-2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400218-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Flt-3/Flk-2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400218-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FLT3 (Flt-3/Flk-2) kodiert eine Rezeptor-Tyrosinkinase der Klasse III, die überwiegend in hämatopoetischen Vorläuferzellen exprimiert wird. Dort führt eine ligandeninduzierte Dimerisierung zur Autophosphorylierung und zur Aktivierung nachgeschalteter Signalübertragung. Aktiviertes FLT3 schaltet die PI3K–AKT-, RAS–MAPK- und JAK–STAT-Signalwege an und reguliert damit Proliferation, Überleben und Differenzierung während der frühen Hämatopoese sowie der Entwicklung dendritischer Zellen. Eine fehlregulierte FLT3-Signalisierung, einschließlich aberranter Aktivierung und veränderter Expression, ist eng mit der Biologie myeloischer Malignome und mit Phänotypen leukämischer Stamm-/Vorläuferzellen verknüpft, weshalb FLT3 ein breit untersuchter Knotenpunkt in onkogenen Signalnetzwerken ist. FLT3 dient zudem als Modellrezeptor zur Untersuchung von RTK-Trafficking, Feedback-Kontrolle und Signalweg-Crosstalk in zytokingetriebenen Kontexten.
Flt-3/Flk-2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FLT3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FLT3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FLT3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FLT3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.