Flt-3/Flk-2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400218-NIC

FLT3（Flt-3/Flk-2）はクラスIII受容体型チロシンキナーゼをコードし、主に造血前駆細胞で発現しています。リガンド結合により二量体化が誘導されると自己リン酸化が起こり、下流のシグナル伝達が活性化されます。活性化されたFLT3はPI3K–AKT、RAS–MAPK、JAK–STAT経路を介して、初期造血および樹状細胞の発生における増殖・生存・分化を制御します。異常な活性化や発現変動を含むFLT3シグナルの破綻は、骨髄系腫瘍の生物学や白血病幹／前駆細胞の表現型と強く関連しており、がん性シグナルネットワークにおいて広く研究されている重要な結節点です。またFLT3は、サイトカイン駆動の状況下でRTKのトラフィッキング、フィードバック制御、経路間クロストークを解析するためのモデル受容体としても用いられています。

Flt-3/Flk-2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FLT3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FLT3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FLT3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FLT3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。