Flotillin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401200-ACT

O gene humano **FLOT2** codifica a flotilina-2, uma proteína de ancoragem associada à membrana, enriquecida em balsas lipídicas e microdomínios semelhantes a caveolas, que organiza complexos de receptores e influencia a curvatura da membrana e o tráfego endocítico. A flotilina-2 participa da transdução de sinais ligada a receptores tirosina-quinase e à atividade das vias **MAPK/ERK** e **PI3K/AKT** a jusante, contribuindo para a regulação da adesão e migração celular e da dinâmica do citoesqueleto. Por seu papel na organização de microdomínios de membrana e no transporte vesicular, **FLOT2** impacta a biologia dos exossomos e o controle espacial de nós de sinalização na membrana plasmática. Alterações na expressão ou na localização da flotilina-2 foram relatadas em diversos tipos de tumor e em outros contextos fisiopatológicos nos quais a desregulação da sinalização e do tráfego de membranas contribui para fenótipos associados à doença.

Flotillin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FLOT2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Flotillin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FLOT2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FLOT2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Flotillin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FLOT2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Flotillin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Flotillin-2 em células tumorais com expressão de FLOT2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.