FLJ23356 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406964

Descripción general

POMK (quinasa de O-manosa proteica), también referida como FLJ23356, codifica una quinasa localizada en el aparato de Golgi necesaria para la fosforilación de la O-manosa en la α-distroglucana, un paso clave en la maduración de los glicanos que permite la unión a la matriz extracelular. Esta actividad funciona dentro de la red de O-manosilación y de glicosilación relacionada con las distroglucanopatías, e interseca con vías que regulan la organización de la membrana basal, la adhesión celular y la integridad del tejido músculo–cerebro. La alteración de la glicosilación dependiente de POMK deteriora las interacciones ligando–receptor de la α-distroglucana y perturba los complejos de señalización asociados a la membrana. Los defectos genéticos en POMK se asocian con distroglucanopatías y fenotipos de distrofia muscular congénita, lo que lo convierte en un locus útil para modelar mecanismos de enfermedad vinculados a la glicosilación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO FLJ23356 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen POMK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del POMK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de POMK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FLJ23356.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en POMK para la investigación de la señalización de FLJ23356, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de POMK críticos para la función de FLJ23356
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de POMK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido FLJ23356 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FLJ23356 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus POMK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FLJ23356 (h) y el plásmido HDR FLJ23356 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología POMK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana POMK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.