Plasmide CRISPR/Cas9 KO FLG/Filaggrin (h): sc-400644

Présentation

FLG code la filaggrine, une protéine clé de la différenciation épidermique, produite sous forme de profilaggrine dans les granules de kératohyaline puis transformée en répétitions de filaggrine qui agrègent les filaments intermédiaires de kératine lors de la maturation terminale des kératinocytes. Les produits de dégradation de la filaggrine contribuent au facteur naturel d’hydratation (NMF), en soutenant l’hydratation de la couche cornée, l’homéostasie du pH et l’intégrité de la barrière cutanée. Par ces fonctions, FLG intervient dans la formation de l’enveloppe cornée, l’organisation des lipides et les voies de signalisation inflammatoire liées au stress de la barrière. Des variants avec perte de fonction ou une expression réduite sont associés à des phénotypes de barrière cutanée altérée et sont largement étudiés dans des modèles de dermatite atopique et d’ichtyose vulgaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FLG/Filaggrin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FLG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FLG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FLG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FLG/Filaggrin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FLG pour l'étude de la signalisation de FLG/Filaggrin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FLG essentiels à la fonction de FLG/Filaggrin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FLG pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FLG/Filaggrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FLG/Filaggrin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FLG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FLG/Filaggrin plasmide HDR (h) et le FLG/Filaggrin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FLG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FLG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.