FKBP25 Double Nickase Plasmid (h): sc-410783-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das FKBP25 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- FKBP25 Double-Nickase-Plasmid (h) und FKBP25 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FKBP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: FKBP25: sc-374357
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
FKBP25 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410783-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FKBP25 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410783-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche Gen **FKBP3** kodiert **FKBP25**, ein nukleäres Immunophilin mit **Peptidyl-Prolyl-cis–trans-Isomeraseaktivität**, das als **Chaperon** für die Proteinfaltung und als **Gerüstprotein (Scaffold)** in chromatinassoziierten Prozessen fungiert. FKBP25 interagiert mit DNA und Transkriptionsregulatoren, um Genexpressionsprogramme zu beeinflussen, und wurde mit der Regulation der Ribosomenbiogenese, von DNA-Schadensantworten und stressadaptiver Signalwege in Verbindung gebracht. Über diese Aktivitäten trägt FKBP25 zur Kontrolle der Zellzyklusprogression und der Proteinhomöostase bei – Signalwege, die in proliferativen und neurodegenerativen Krankheitskontexten häufig gestört sind. Veränderte FKBP3/FKBP25-Expression oder -Lokalisierung wurde in mehreren krankheitsrelevanten Situationen beschrieben, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung nukleärer Proteinkontrolle und transkriptioneller Regulation unterstreicht.
FKBP25 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FKBP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FKBP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FKBP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FKBP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.