Plásmido Doble Nickase (h) FKBP12.6: sc-401445-NIC

FKBP1B codifica FKBP12.6, una pequeña inmunofilina con actividad de isomerasa peptidil‑prolil cis‑trans que se une a ligandos inmunosupresores y actúa como regulador de la señalización del calcio. FKBP12.6 se asocia con los canales del receptor de rianodina, en particular RyR2, para modular la liberación de Ca²⁺ del retículo sarcoplásmico/endoplásmico y el acoplamiento excitación–contracción, integrando señales que afectan al metabolismo mitocondrial y a las respuestas al estrés. A través de su actividad tipo chaperona y de sus interacciones proteína–proteína, FKBP12.6 influye en la proteostasis y en la compuerta del canal dependiente de la fosforilación. La actividad desregulada de FKBP1B/FKBP12.6 y la homeostasis alterada de Ca²⁺ se han vinculado con la arritmogénesis cardíaca y otros fenotipos relacionados con el manejo del calcio, lo que respalda estudios mecanísticos en cardiomiocitos y modelos de células excitables.

FKBP12.6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus FKBP1B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de FKBP1B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de FKBP1B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con FKBP1B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.