Plasmide Double Nickase (h) Fibulin-3: sc-401978-NIC

EFEMP1 code la fibuline‑3, une glycoprotéine sécrétée de la matrice extracellulaire qui s’associe aux réseaux de fibres élastiques et à l’architecture des membranes basales. La fibuline‑3 module les interactions cellule–matrice, le remodelage tissulaire et l’équilibre des protéases, notamment via la régulation de l’activité des métalloprotéinases et une communication croisée de signalisation avec des voies telles que TGF‑β et EGFR, qui influencent l’adhérence, la migration et les réponses au stress. L’expression d’EFEMP1 est associée à l’homéostasie de la matrice extracellulaire dans des tissus oculaires, vasculaires et épithéliaux, et sa dysrégulation a été étudiée dans des contextes impliquant un dépôt matriciel aberrant, une protéostasie altérée et une signalisation angiogénique modifiée. Ces caractéristiques font d’EFEMP1 une cible utile pour des études mécanistiques du comportement cellulaire piloté par la MEC et de phénotypes dépendants du microenvironnement.

Fibulin-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus EFEMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de EFEMP1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de EFEMP1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de EFEMP1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.