Fibulin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432105
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Fibulin-3 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Fibulin-3, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Fibulin-3 Anticuerpo (mab3-5): sc-33722
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Fibulin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-432105 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Efemp1 codifica la fibulina-3, una glicoproteína secretada de la matriz extracelular que se asocia con fibras elásticas y componentes de la membrana basal para regular la organización de la matriz, la adhesión celular y la biomecánica tisular. La fibulina-3 influye en la remodelación de la matriz extracelular mediante interacciones con metaloproteinasas y sus inhibidores, modulando la proteostasis y señales que afectan la angiogénesis y la migración celular. En tejidos de ratón, Efemp1 contribuye a la homeostasis del tejido conectivo y del sistema vascular, y se ha vinculado a fenotipos degenerativos y fibróticos cuando se desregula. Estas propiedades hacen de Efemp1 un objetivo útil para desentrañar vías impulsadas por la matriz extracelular en el desarrollo, el envejecimiento y la remodelación asociada a la inflamación.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Efemp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Efemp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Efemp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fibulin-3.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Efemp1 para la investigación de la señalización de Fibulin-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Efemp1 críticos para la función de Fibulin-3
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Efemp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Efemp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fibulin-3 (m) y el plásmido HDR Fibulin-3 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Efemp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Efemp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.