Fibulin-3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401978

Descripción general

EFEMP1 codifica la fibulina-3, una glucoproteína secretada de la matriz extracelular que se asocia con las fibras elásticas y con componentes de la membrana basal para regular el ensamblaje de la matriz, la adhesión célula–matriz y la remodelación tisular. La fibulina-3 modula la actividad de proteasas y el recambio de la matriz extracelular, incluidas interacciones que influyen en la remodelación mediada por MMP/ADAMTS, y se ha vinculado a contextos de señalización como TGF-β/SMAD que coordinan la fibrosis y programas epitelio–mesénquima. En tejidos humanos, la expresión de EFEMP1 es relevante para la homeostasis vascular y ocular, y se han asociado niveles alterados de fibulina-3 con fenotipos degenerativos de la retina y con cambios en la arquitectura del estroma en biología del cáncer. Estas funciones hacen de EFEMP1 un punto de entrada útil para estudiar la regulación de la matriz extracelular, las redes de proteínas secretadas y el comportamiento celular dependiente del microambiente.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Fibulin-3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen EFEMP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del EFEMP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de EFEMP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Fibulin-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en EFEMP1 para la investigación de la señalización de Fibulin-3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de EFEMP1 críticos para la función de Fibulin-3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de EFEMP1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Fibulin-3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus EFEMP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Fibulin-3 (h) y el plásmido HDR Fibulin-3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología EFEMP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana EFEMP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.