Plasmide CRISPR d'Activation (h) Fibrinogen β: sc-401819-ACT

FGB code la chaîne bêta du fibrinogène, un composant essentiel de l’hexamère de fibrinogène qui est converti par protéolyse par la thrombine en fibrine lors de la phase terminale de la cascade de coagulation. En plus de ses interactions avec l’intégrine plaquettaire αIIbβ3 et d’autres protéines de la matrice extracellulaire, le fibrinogène favorise la formation du caillot, la réparation tissulaire et la modulation du recrutement des cellules inflammatoires. L’expression de FGB est étroitement liée aux réponses hépatiques de phase aiguë et aux programmes de signalisation des cytokines qui remodèlent la composition des protéines plasmatiques lors de l’inflammation systémique. Des perturbations génétiques ou acquises de la structure ou de l’abondance du fibrinogène ont été associées à des phénotypes hémorragiques ou thrombotiques, ce qui fait de FGB un nœud d’étude pertinent pour l’hémostase et les pathologies vasculaires associées à l’inflammation.

Fibrinogen β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FGB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Fibrinogen β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FGB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FGB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Fibrinogen β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FGB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Fibrinogen β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Fibrinogen β dans les cellules tumorales présentant une expression de FGB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.