Plásmido CRISPR de Activación (h) Fibrinogen α: sc-400793-ACT

FGA codifica la cadena alfa del fibrinógeno, un componente central del hexámero de fibrinógeno plasmático que la trombina convierte por proteólisis en fibrina durante la coagulación. Más allá de la formación del coágulo, la fibrina(o)geno interviene en la agregación plaquetaria, la adhesión mediada por integrinas y la remodelación de la matriz extracelular, conectando la hemostasia con la inflamación y la reparación tisular. La regulación de la expresión de FGA en hepatocitos y en contextos de fase aguda influye en los niveles circulantes de fibrinógeno y en la señalización posterior en las vías de trombina/PAR y de fibrinólisis. La producción o el procesamiento desregulados de fibrinógeno se asocian con trastornos hereditarios del fibrinógeno y contribuyen a fenotipos de enfermedad trombótica e inflamatoria relevantes para la investigación en biología cardiovascular y hepática.

Fibrinogen α El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FGA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fibrinogen α El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FGA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FGA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fibrinogen α. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FGA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fibrinogen α en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fibrinogen α en células tumorales con expresión de FGA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.